核糖含量测定

1　试剂

1.1　0.31mol　/L　三氯醋酸

称取三氯醋酸5g，加蒸馏水溶解成100ml。

1.2　0.61　mol　/L三氯醋酸

称取三氯醋酸10g，加蒸馏水溶解成100ml。

1.3　0.019mol　/L　三氯化铁-盐酸溶液

称取三氯化铁（FeCl3·6H2O）0.5g，加浓盐酸溶解成500ml，可长期使用。

1.4　1%二羟基甲苯（苔黑酚）

称取二羟基甲苯1g，溶于0.019mol　/L　三氯化铁-盐酸溶液中，临用新配。

1.5　标准核糖溶液

精密称取D核糖20mg，溶于0.31mol　/L　三氯醋酸，准确稀释至100ml为200μg　/ml核糖标准贮备液。精密吸取贮备液2.5ml于25ml容量瓶中，用0.31mol　/L　三氯醋酸稀释至刻度，即为标准核糖溶液（20μg/ml）。

2　操作

精密量取转移因子待检品1ml于试管中，另0.61mol　/L三氯醋酸1ml，置沸水浴水解15分钟，再吸取水解液0.4ml，加0.31ml/L三氯醋酸1.6ml,及1%二羟基甲苯2ml,混匀,再置沸水浴中加热30分钟,冷却至室温,在650nm波长测定OD值,同时准确吸取核糖标准液1ml,加0.31mol/L三氯醋酸1ml,混匀,其余操作同样品,并做空白对照。

3　计算

样品OD值

核糖含量(μg/ml)=　─────×20×5

标准OD值