吸附精制白喉类毒素制造及检定规程

本品系精制白喉类毒素经氢氧化铝吸附制成。用于预防白喉。

1　毒素制造

1.1菌种

1.1.1　应选用中国药品生物制品检定所分发或同意的白喉杆菌PW8株，或经由PW8株筛选的产毒高、免疫力强的菌种。必要时可对菌种进行筛选。

1.1.2　菌种宜用冻干法保存。亦可用血清斜面或产毒培养基传代保存，但代数不宜过多。

1.2　培养基

宜用胰酶牛肉消化液培养基或其他适宜培养基，但不得采用马肉或其他马体组织，应尽量减少对人体引起过敏反应的物质，不应含有可以引起人体毒性反应的物质。

1.3　毒素

1.3.1　毒素制造过程应严格控制杂菌污染。凡经镜检或纯菌试验发现污染者应废弃。

1.3.2　用于生产的毒素效价不得低于150Lf/ml。

1.3.3培养物加甲醛溶液或甲苯杀菌后进行精制或过滤后进行脱毒。所用化学原料应符合《中国生物制品主要原材料试行标准》。

2　精制

2.1毒素或类毒素可采用硫酸铵活性炭二段盐析法或其他适宜方法精制。

2.2用于精制的毒素或类毒素可多批混合，但不得超过5批。

2.3精制过程应避免染菌，透析过程可加适量防腐剂，有肉眼可见染菌者应废弃。

2.4　化学原料等级应不低于化学纯。

2.5用同一菌种、培养基处方、精制方法制造的类毒素在同一容器内混合均匀后除菌过滤者为1批。除菌不彻底者可重滤。

3　类毒素制造

3.1制造过程应减少污染机会，如有肉眼可见染菌应予废弃。

3.2　毒素或精制毒素中加入适量的甲醛溶液，置适宜温度进行脱毒。精制毒素亦可加适量赖氨酸后再加甲醛脱毒。所用化学原科等级不应低于化学纯。

3.3　脱毒试验

每瓶类毒素或精制类毒素取样，用灭菌生理盐水分别稀释至100Lf/ml，用体重2.0kg左右的家兔2只，每只动物分别皮内注射上述稀释样品各0.1ml及25倍稀释的锡克毒素0.1ml,于96小时判定结果。样品注射部位须无反应或仅有几无可量的反应，锡克反应须为阳性。

3.4　脱毒不完全者可继续脱毒，必要时可补加适量甲醛溶液。

3.5　用于生产的类毒素效价不应低于100Lf/ml。

3.6　毒性逆转试验

每瓶精制类毒素取样，用pH7.0～7.4磷酸盐缓冲盐水分别稀释至30～50Lf/ml，置37℃20～30天，用体重2.0kg左右的家兔2只，每只家兔分别皮内注射上述稀释样品各0.1ml及25倍稀释的锡克毒素0.1ml，于72小时判定结果。样品注射部位红肿反应直径不应超过15mm，锡克反应须为阳性。

3.7　精制类毒素应加0.01%(g/ml)硫柳汞为防腐剂，毒素精制法制造的精制类毒素未除游离甲醛者可免加防腐剂。

3.8　类毒素保存于2～8℃，自脱毒合格之日起不得超过3年。

4　精制类毒素检定和保存

4.1pH应为6.4～7.4

4.2　无菌试验

按《生物制品无菌试验规程》进行

4.3　纯度

应不低于1500Lf/mgPN。

4.4　安全试验

用生理盐水将各亚批等量混合的精制类毒素稀释成50Lf/ml，用体重300～400g豚鼠4只，每只腹侧皮下注射5ml，观察30天。前5日注意观察注射局部，第10、20、30天称取体重。观察期间每只动物体重不得持续下降，到期每只动物体重应比注射前增加，注射局部无坏死，无连片脱皮、脱毛。后期不得有麻痹症状。

4.5　效力试验

将各亚批等量混合的精制类毒素稀释成35Lf/ml，用体重270～350g健康豚鼠5只，每只皮下注射0.5ml，第30天各攻击10MLD白喉毒素。用于配制含有百日咳菌苗的制品，可按成品比例与百日咳菌苗配成小量二联制剂样品，免疫方法与剂量同上，第30天各皮下攻击50MLD白喉毒素。二种攻毒均观察7日，攻击后动物死亡数不得超过20%。同时另用体重240～270g健康豚鼠3只，各皮下攻击1MLD白喉毒素作对照，其中2只应在96小时内死亡，允许1只晚死或发病。

4.6　保存与效期

保存于2～8℃。自精制之日起效期为3年半。

5　吸附剂的配制

见《吸附精制破伤风类毒素制造及检定规程》中5项。

6　吸附精制类毒素的制造

6.1吸附制品应含精制白喉类毒素30～50Lf/ml。

6.2氢氧化铝用量不得超过3mg/ml。

6.3　吸附制品应加0.005%～0.01%（g/ml）硫柳汞为防腐剂。

6.4　同批精制类毒素及同批吸附剂吸附的制品为1批。用大罐吸附者每罐为1批，所用精制类毒素及吸附剂可多批混合，但各不得超过3批。

7　成品检定

7.1理化性状

7.1.1　吸附精制白喉类毒素振荡后应为乳白色均匀悬液，无摇不散的凝块或异物。

7.1.2pH值应为6.0～7.0。

7.1.3　氢氧化铝含量不应超过3mg/ml。

7.1.4　氯化钠含量为0.75%～0.9%（g/ml）。

7.1.5硫柳汞含量不应超过0.01%（g/ml）。

7.1.6　游离甲醛含量不应超过0.02%（g/ml）。

7.2　无菌试验

按《生物制品无菌试验规程》进行。

7.3　安全试验

每亚批取样等量混合，用体重300～400g健康豚鼠4只，每只腹侧皮下注射2.5ml，观察30天，注射部位可有浸润，经5～10天变成硬结，30天可吸收不完全，在第10、20、30天称体重，到期每只动物体重比注射前增加，豚鼠无晚期麻痹者评为合格。

7.4　效力试验

每亚批取样等量混合，用体重300～350g健康豚鼠5只，每只皮下注射0.1ml，第30天各皮下攻击200MLD白喉毒素，观察7日，攻毒后动物死亡数不应超过20%。同时另用体重240～270g健康豚鼠3只，各皮下攻击1MLD白喉毒素作对照，其中2只应在96小时内死亡，允许1只晚死或发病。

亦可按WHO推荐的效力试验方法（见附录）进行。

7.5　稳定性试验

生产工艺有改变时应做稳定性试验。抽三批不同批号的精制类毒素配制的成品，保存于2～8℃，在效期结束之日进行效力检定，应符合规程要求。

7.6　鉴别试验

抽取样品加构橼酸钠将吸附剂溶解后作絮状试验，或将样品调pH至9.0作凝胶免疫沉淀试验，以出现絮状反应或免疫沉淀反应者为合格。

8　保存与效期

保存于2～8℃。自吸附之日起效期为3年。