附录2　需-厌氧菌无菌试验培养基灵敏度试验法

1　菌种

1.1　需氧菌

乙型溶血性链球菌（32210株），短芽胞杆菌（7316株）。

1.2厌氧菌

生孢子梭状芽胞杆菌（64941株）。

以上菌株均由中国药品生物制品检定所分发。

2　培养基

凡应用于无菌试验的培养基（增菌和试验用）都应进行灵敏度试验。

3　操作

3.1　不应在同一无菌操作室内同时操作2个菌株。

3.2　将菌种接种于适宜的培养基，经30～35℃培育一定时间（乙型溶血性链球菌和生孢子梭状芽胞杆菌培育24～48小时，短芽胞杆菌培育18～20小时）后，将乙型溶血性链球菌和短芽胞杆菌分别刮入灭菌的生理盐水内制成均匀菌液，生子孢梭状芽胞杆菌先将菌液吸入灭菌的试管内，再用灭菌生理盐水稀释适宜浓度制成均匀菌液，再将菌液稀释至与标准比浊管相同之浓度。然后用0.1%蛋白胨水作10倍系列稀释。

3.3　将10[SB]-6[/SB]～10[SB]-8[/SB]（短芽胞杆菌、生子孢梭状芽胞杆菌为10[SB]-6[/SB]～10[SB]-8[/SB]，乙型溶血性链球菌为10[SB]-7[/SB]～10[SB]-9[/SB]）菌液各1ml分别接种到9ml（用于厌氧菌的培养基在试管中装置高度不得低于7cm）试验用培养基中，每个稀释度至少接种3管，并用未接种的培养基做对照，将接种乙型溶血性链球菌、生子孢梭状芽胞杆菌的培养基，置30～35℃培育3天，接种短芽胞杆菌的培养基培育5天，记录结果。

4　结果判定

以接种后培养基管数的2/3以上呈现生长的最高稀释度为该培养基的灵敏度，3次试验中，以2次达到的最高灵敏度为判定标准。